(录用定稿)网络首发时间:2021-08-13 11:20

SARS-CoV-2 受体结合域蛋白的表达、纯化和鉴定

目的 实现严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severeacuterespiratorysyndromecoronavirus2,SARS-CoV-2)受体结合域(receptor-bindingdomain,RBD)蛋白的高效分泌表达,获得纯度较高的目的蛋白,并对目的蛋白与不同抗体的结合活性进行比较分析。方法 将SARS-CoV-2S蛋白RBD和RBD-MouseIgG2aFc基因优化合成后分别克隆入pcDNA3.1(+)或者pLexm表达载体,然后将获得的重组质粒转染HEK293F细胞,比较不同表达载体及添加标签对目的蛋白表达量的影响,选取表达量高的重组质粒进行后续转染,收获细胞上清后进行蛋白纯化。纯化后的蛋白分别与灭活SARS-CoV-2免疫马血清、CR3022抗体进行反应,比较RBD蛋白与不同抗体的结合活性。结果成功构建含SARS-CoV-2RBD序列的不同重组表达质粒,表达结果显示,与其他质粒相比,RBD-mg2afc/pcDNA3.1(+)在细胞上清中获得较高水平的表达。纯化后的RBD蛋白纯度大于95%,Westernblot检测结果显示,加热变性后的目的蛋白可以与灭活SARS-CoV-2免疫马血清发生特异性反应,但是与CR3022抗体几乎不发生反应;ELISA检测结果表明,纯化后RBD蛋白可以与2种抗体均发生特异性反应,当抗原包被量低于500 ng/孔时,RBD蛋白与灭活SARS-CoV-2免疫马血清的结合能力高于其与CR3022抗体的结合能力,当抗原包被量高于500 ng/孔时,RBD蛋白与CR3022抗体的结合能力更强。结论成功表达和纯化了RBD蛋白,该蛋白在不同包被抗原量条件下与抗体的结合活性不同。

严重急性呼吸综合征冠状病毒2; 受体结合域蛋白; 表达; 结合活性;

R373.9;R341;R392.116;

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